氨基酸的存在形態(tài)

氨基酸在生物體中主要有兩種形態(tài)存在：一種是游離氨基酸，以游離態(tài)存在的單個(gè)氨基酸分子，可被直接吸收利用；另一種是水解氨基酸，需要將待檢產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)、多肽等氨基酸鏈水解成單個(gè)氨基酸，因此，水解氨基酸反映的是產(chǎn)品中所有氨基酸單位（單個(gè)或多個(gè)）的組成。

水解氨基酸的前處理方法

確定蛋白質(zhì)的氨基酸組成需要兩個(gè)步驟:

第一步水解，即將蛋白質(zhì)肽鍵打開，釋放出單個(gè)氨基酸，然后進(jìn)行回收。分析樣品的多樣性造成了樣品前處理的復(fù)雜性。有研究顯示，水解的不合理是影響氨基酸分析正確性的首要原因。

第二步分析，即利用色譜技術(shù)對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，以確定氨基酸的種類及其含量。

由于氨基酸回收的復(fù)雜性，需要針對(duì)不同類型的氨基酸來(lái)選擇適合的水解方法，主要有酸水解、氧化水解、堿水解、和酶水解。以下針對(duì)較常用的酸水解進(jìn)行介紹。

酸水解法

酸水解法是氨基酸分析中較常用的前處理方法， 22種α-氨基酸中大多數(shù)可采用酸水解法，即用6M高純度的鹽酸將蛋白質(zhì)裂解成單個(gè)游離氨基酸，隨后把殘留的鹽酸蒸發(fā)去除。

水解過(guò)程中使用6M HCl進(jìn)行水解22-24小時(shí)，水解后的氨基酸需要取1-2ml溶液放在真空離心濃縮儀中濃縮蒸干，加入2ml水后就繼續(xù)濃縮蒸干，重復(fù)兩次上述操作，以保證去除鹽酸。高濃度鹽酸去除時(shí)，由于鹽酸的強(qiáng)腐蝕性，常規(guī)的濃縮儀的管路、真空泵、腔體等部件容易被腐蝕，所以一款真正耐鹽酸的濃縮儀是減少實(shí)驗(yàn)室成本的關(guān)鍵。

耐強(qiáng)酸的溶劑蒸發(fā)工作站

市面上的濃縮設(shè)備有很多種，但真正能耐受高濃度鹽酸、硝酸和TFA的設(shè)備卻不多見。Genevac EZ-2 4.0溶劑蒸發(fā)工作站不僅能耐受6M鹽酸，還能實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守、自動(dòng)停機(jī)等功能。

Genevac EZ-2 4.0

耐鹽酸的核心：

1、方便替換的金屬全部由哈氏合金或玻璃替代；其余均用特氟龍密封工藝處理；

2、離心腔、樣品架都通過(guò)PTFE密封工藝進(jìn)行陽(yáng)極氧化處理；

3、聚四氟乙烯制造的蒸汽截止閥和波紋管；

4、真空出口連接器采用聚丙烯制造；

5、密封圈采用杜邦Kalrez全氟醚橡膠，可耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿。

其他優(yōu)勢(shì)：

●   Sample Guard? 控溫系統(tǒng)，防止樣品過(guò)熱；

●   Dri-Pure®防暴沸功能：防止樣品暴沸產(chǎn)生交叉污染，避免樣品損失；

●   樣品容器兼容性強(qiáng)、通量高：多種轉(zhuǎn)子可選；

●   Sample Genie樣品轉(zhuǎn)移功能：濃縮后可直接將樣品轉(zhuǎn)移至GC小瓶?jī)?nèi)上機(jī)測(cè)試，無(wú)需二次轉(zhuǎn)移；

●   無(wú)人值守，自動(dòng)停機(jī)。

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